質粒提取試劑盒操作步驟：
使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。溶液YP1在使用前先加入RNaseA（將試劑盒中提供的 RNaseA全部加入），混勻，置于 2-8℃保存。如非指明，所有離心步驟均為使用臺式
離心機在室溫下離心。
1、取1-5ml酵母培養物（不超過 5×107cells），12000rpm離心 1min，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）。
2、酵母細胞壁的破除：
A、酶法：向酵母菌體中加入 470ul 山梨醇 Buffer，充分懸浮菌體，加入 25ul 酵母破壁酶和 5ul β-巰基乙醇，充分混勻，30℃處理 1-2h，期間可顛倒離心管混勻數次。12000rpm 離心 1min，棄上清，收集沉淀。向沉淀中加入 250ul 溶液 YP1（請先檢查是否已加入 RNaseA） ，充分懸浮沉淀。注意：如果菌塊未徹底混勻，會影響裂解導致質粒提取量和純度偏低。
B、玻璃珠法：向酵母
菌體中加入 250ul 溶液 YP1（請先檢查是否已加入 RNaseA） ，充分懸浮沉淀。加入 150-200ul酸洗玻璃珠（自備），漩渦振蕩 10min。簡短離心使玻璃珠沉降到離心管底，吸取上清（如上清有所損失，請用溶液 YP1 補足至 250ul）于另一干凈離心管中。
3、向離心管中加入 250ul溶液 YP2，溫和地上下翻轉 6-8 次使菌體充分裂解。注意：混勻一定要溫和，以
免污染細菌基因組 DNA，此時菌液應變得清亮粘稠，作用時間不要超過 5 min，以免質粒受到破壞。
4、向離心管中加入 350ul溶液 YP3，立即溫和地上下翻轉 6-8次，充分混勻，此時會出現白色絮狀沉淀。12000rpm離心 10 min，用移液器小心地將上清轉移到另一個干凈的離心管中，盡量不要吸出沉淀。注意：溶液 YP3 加入后應立即混合，避免產生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清。
5、將上一步所得上清液加入吸附柱中，室溫放置 2min，12000rpm 離心 1min，倒掉收集管中的廢液，吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入 500ul漂洗液，12000rpm離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
8、12000rpm 離心 2min，將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數分鐘，目的是將吸附柱中殘余的 漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續的實驗如酶切、PCR 等。
9、將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經 65℃水浴預熱的洗脫 液，室溫放置 2min，12000rpm離心 1min。
10、為了增加質粒的回收效率，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中，室溫放置 2min， 12000rpm離心 1min。 操作步驟：
使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。溶液YP1在使用前先加入RNaseA（將試劑盒中提供的 RNaseA全部加入），混勻，置于 2-8℃保存。如非指明，所有離心步驟均為使用臺式
離心機在室溫下離心。
1、取1-5ml酵母培養物（不超過 5×107cells），12000rpm離心 1min，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）。
2、酵母細胞壁的破除：
A、酶法：向酵母
菌體中加入 470ul 山梨醇 Buffer，充分懸浮菌體，加入 25ul 酵母破壁酶和 5ul β-巰基乙醇，充分混勻，30℃處理 1-2h，期間可顛倒離心管混勻數次。12000rpm 離心 1min，棄上清，收集沉淀。向沉淀中加入 250ul 溶液 YP1（請先檢查是否已加入 RNaseA） ，充分懸浮沉淀。注意：如果菌塊未徹底混勻，會影響裂解導致質粒提取量和純度偏低。
B、玻璃珠法：向酵母菌體中加入 250ul 溶液 YP1（請先檢查是否已加入 RNaseA） ，充分懸浮沉淀。加入 150-200ul酸洗玻璃珠（自備），漩渦振蕩 10min。簡短離心使玻璃珠沉降到離心管底，吸取上清（如上清有所損失，請用溶液 YP1 補足至 250ul）于另一干凈離心管中。
3、向離心管中加入 250ul溶液 YP2，溫和地上下翻轉 6-8 次使菌體充分裂解。注意：混勻一定要溫和，以
免污染細菌基因組 DNA，此時菌液應變得清亮粘稠，作用時間不要超過 5 min，以免質粒受到破壞。
4、向離心管中加入 350ul溶液 YP3，立即溫和地上下翻轉 6-8次，充分混勻，此時會出現白色絮狀沉淀。12000rpm離心 10 min，用移液器小心地將上清轉移到另一個干凈的離心管中，盡量不要吸出沉淀。注意：溶液 YP3 加入后應立即混合，避免產生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清。
5、將上一步所得上清液加入吸附柱中，室溫放置 2min，12000rpm 離心 1min，倒掉收集管中的廢液，吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入 500ul漂洗液，12000rpm離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
8、12000rpm 離心 2min，將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數分鐘，目的是將吸附柱中殘余的 漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續的實驗如酶切、PCR 等。
9、將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經 65℃水浴預熱的洗脫 液，室溫放置 2min，12000rpm離心 1min。
10、為了增加質粒的回收效率，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中，室溫放置 2min， 12000rpm離心 1min。 操作步驟：
使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。溶液YP1在使用前先加入RNaseA（將試劑盒中提供的 RNaseA全部加入），混勻，置于 2-8℃保存。如非指明，所有離心步驟均為使用臺式
離心機在室溫下離心。
1、取1-5ml酵母培養物（不超過 5×107cells），12000rpm離心 1min，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）。
2、酵母細胞壁的破除：
A、酶法：向酵母菌體中加入 470ul 山梨醇 Buffer，充分懸浮菌體，加入 25ul 酵母破壁酶和 5ul β-巰基乙醇，充分混勻，30℃處理 1-2h，期間可顛倒離心管混勻數次。12000rpm 離心 1min，棄上清，收集沉淀。向沉淀中加入 250ul 溶液 YP1（請先檢查是否已加入 RNaseA） ，充分懸浮沉淀。注意：如果菌塊未徹底混勻，會影響裂解導致質粒提取量和純度偏低。
B、玻璃珠法：向酵母菌體中加入 250ul 溶液 YP1（請先檢查是否已加入 RNaseA） ，充分懸浮沉淀。加入 150-200ul酸洗玻璃珠（自備），漩渦振蕩 10min。簡短離心使玻璃珠沉降到離心管底，吸取上清（如上清有所損失，請用溶液 YP1 補足至 250ul）于另一干凈離心管中。
3、向離心管中加入 250ul溶液 YP2，溫和地上下翻轉 6-8 次使菌體充分裂解。注意：混勻一定要溫和，以
免污染細菌基因組 DNA，此時菌液應變得清亮粘稠，作用時間不要超過 5 min，以免質粒受到破壞。
4、向離心管中加入 350ul溶液 YP3，立即溫和地上下翻轉 6-8次，充分混勻，此時會出現白色絮狀沉淀。12000rpm離心 10 min，用移液器小心地將上清轉移到另一個干凈的離心管中，盡量不要吸出沉淀。注意：溶液 YP3 加入后應立即混合，避免產生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清。
5、將上一步所得上清液加入吸附柱中，室溫放置 2min，12000rpm 離心 1min，倒掉收集管中的廢液，吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入 500ul漂洗液，12000rpm離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
8、12000rpm 離心 2min，將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數分鐘，目的是將吸附柱中殘余的 漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續的實驗如酶切、PCR 等。
9、將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經 65℃水浴預熱的洗脫 液，室溫放置 2min，12000rpm離心 1min。
10、為了增加質粒的回收效率，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中，室溫放置 2min， 12000rpm離心 1min。
原創作者：上海莼試生物技術有限公司
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021-59541103 021-60443211
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![人胚腎細胞；293 [HEK-293]](http://img5.zhihuilv.com/223/Products/Small/20190314/201903141023106619.jpg)
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