1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。
His標簽蛋白純化試劑盒樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。9. 接下來，使用75%乙醇洗滌RNA沉淀，以去除殘留的異丙醇和鹽類。向含有RNA沉淀的離心管中加入至少1ml的75%乙醇（用無RNA酶水配制），輕輕顛倒離心管數次以洗滌RNA沉淀，避免劇烈振蕩導致RNA碎裂。
10. 再次進行離心，條件為2-8℃下10000×g離心5分鐘。離心后，小心移除乙醇，注意不要吸走RNA沉淀。可短暫空氣干燥RNA沉淀，但需注意避免過度干燥，以免RNA難以溶解。
11. 使用適量的無RNA酶水（通常為20-50μl，根據RNA沉淀量調整）溶解RNA沉淀。輕輕吹打或用移液器輕輕吸打幾次，幫助RNA完全溶解。將溶解后的RNA溶液置于冰上，或立即進行下游實驗，如反轉錄或RNA質量檢測。
12. RNA質量驗證：可通過電泳觀察RNA條帶（28S、18S和5S）的完整性，以及使用分光光度計測定RNA的濃度和純度（A260/A280比值應接近2.0）。高質量的RNA是進行后續分子生物學實驗的關鍵。
13. 若需進一步純化或使用His標簽蛋白純化試劑盒進行蛋白純化，請按照試劑盒的詳細說明書進行，注意操作過程中的還原劑和螯合劑耐受性要求，確保實驗結果的準確性和可靠性。
14. 最后，請妥善保存RNA和純化后的蛋白樣品，避免反復凍融，以保證其穩定性和活性，為后續實驗提供可靠的材料支持。
原創作者：上海莼試生物技術有限公司
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