注意事項

 

1. 常規消化收集細胞離心。

 

2. 離心后去掉離心管內上清，加入1ml左右重懸細胞混勻，建議輕輕晃動或者輕輕吹打細胞， 放入培養箱消化細胞，再消化1min左右。

 

3. 消化好后，用移液槍輕輕吹打細胞懸液，使細胞團分散，迅速加入3-5ml含血清的培養基混勻以終止消化，離心去除

 

4. 加入5ml左右的細胞相應的培養基混勻，按比例接入培養瓶/皿中。

 

5.顯微鏡下觀察看細胞是否成均勻分散的單細胞，若有少量成團的小細胞團可不用重新消化，使之貼壁后待細胞生長穩定后再消散細胞。

 

常溫發貨

 

收到后T25瓶消毒再放置培養箱靜置2-3小時后觀察密度和狀態拍照2-3張反饋給銷售，密度達標就可以傳代。前期傳代比例1:2，等再次長滿后傳代時建議凍存其中一整瓶成1個1ml凍存管，另外一瓶繼續傳代，反復凍存2-3只后才擴增做實驗，以防突發情況引起斷種。

 

干冰發貨常規細胞發貨凍存管2只，復蘇1只，另外一只備用，第一個復蘇不成功時嚴格按照廠家要求復蘇第二個，均沒有復蘇成功的情況即時留存復蘇照片通知我們。

 

貼壁細胞

 

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

 

2. 加入0.25％(w / v）0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化３.３.３.３.3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶/6cm培養皿中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

 

4. 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

 

５. 運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的培養基來培養細胞。

 

懸浮細胞

 

HEP-53.4 小鼠肝癌細胞懸浮狀態下生長的細胞在HEP-53.4小鼠肝癌細胞懸浮狀態下的深入研究中，我們觀察到了一種前所未有的細胞適應性與增殖特性。這些細胞在脫離傳統貼壁培養環境后，不僅未顯現出生長抑制或凋亡的跡象，反而展現出了一種更為活躍的代謝狀態和增殖速率。通過高分辨率顯微鏡的實時監測，我們可以清晰地看到細胞間的動態交互變得更加頻繁，它們似乎在通過某種未知的機制交換著生長信號與營養物質，共同維持著懸浮體系中的生態平衡。

 

進一步的分析揭示了懸浮狀態下細胞骨架結構的微妙變化。與貼壁時相比，這些細胞的微管與微絲網絡更加靈活多變，能夠迅速響應外部環境的微擾，從而確保細胞在三維空間中的穩定懸浮與高效遷移。這種結構上的適應性調整，很可能是細胞在懸浮條件下生存與繁衍的關鍵策略之一。

 

此外，我們還發現懸浮培養的HEP-53.4細胞在分泌因子譜上發生了顯著變化。一系列與細胞增殖、遷移及抗凋亡相關的蛋白質表達上調，這些變化不僅增強了細胞的生存能力，還可能促進了腫瘤微環境的重塑，為細胞的進一步擴散與侵襲鋪平了道路。

 

為了驗證這些發現的臨床意義，我們正著手構建模擬體內循環系統的體外培養模型，以更貼近生理條件地研究懸浮狀態下肝癌細胞的生物學行為。同時，我們也在積極探索針對這一特殊生長狀態的有效干預策略，旨在為肝癌的治療開辟新的途徑。未來的研究將聚焦于揭示懸浮細胞特有的信號通路與調控機制，以及這些機制如何影響腫瘤的發生、發展與治療響應，最終為改善患者預后提供科學依據。

​，可以通過向培養瓶中添加培養基來維持細胞的生長狀態，一般情況下細胞密度維持在1×10⁵~1×10⁶個/mL(不同細胞對密度要求不同）可以維持細胞的正常生長。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:4的比例進行。

 

運輸形式低溫：1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

 

常溫: T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。