ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測定）作為一種高度特異且靈敏的生物分析技術(shù)，其間接法測抗體模式在生物醫(yī)學研究中占據(jù)舉足輕重的地位。這一模式巧妙運用了抗原-抗體反應的特異性以及酶促反應的放大效應，為檢測生物樣品中特定抗體提供了強有力的工具。
基本方法的操作如下:
1．將病原體的抗原在碳酸鹽緩沖液中4~C過夜包被，形成固相抗原，洗滌去除未與固相結(jié)合或結(jié)合不緊的抗原后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封閉，洗滌去除未結(jié)合的部分及雜質(zhì)。
2．加入含待測抗體的臨床樣本如血清等，溫育一定時間后洗板；此時，待測抗體就會與固陽上特異抗原反應而吸附于固相上。
3．加入酶標記的抗人IgG抗體，溫育一定時間后洗板；此時，在固相上即形成固相抗原—待測抗體—酶標二抗復合物。
4．加入酶底物，溫育顯色測定(圖2—6)。
間接法測抗體在目前應用最多的是丙型肝炎病毒抗體(抗HCV)、人免疫缺陷病毒抗體(抗HIV)以及梅毒螺旋體抗體等的測定。從上述的測定模式可見，間接法測抗體，嚴格地講，所測定的僅為抗體的IgG類，不涉及IgM和IgA類，這是由酶標二抗體所決定的。
影響間接法測定抗體的一個較大的因素是包被抗原的純度。現(xiàn)在間接法測抗體中所使用的抗原一般均為基因工程重組抗原，如HCV的3，4，5，HIV的gp41和gpl20和梅毒螺旋體Tl5，Tl7，T47等。基因工程抗原在純化時應盡量去除用來表達的宿主如大腸桿菌的抗原，以免由于機體存在對這種宿主抗原的抗體而引起假陽性反應。此外，由于機體的IgG類抗體濃度較高，其中絕大部分為機體接觸外界環(huán)境刺激所產(chǎn)生的非特異IgG，因此，為避免這些高濃度非特異IgG對固相的吸附所致的假陽性反應，通常需對待測樣本做一定程度的稀釋。
在間接法ELISA中，首先，將待檢測的抗原固定于固相載體表面，形成一層均勻的抗原膜，宛如鋪設(shè)了一條通往特異性識別的橋梁。隨后，待測樣品中的抗體（目標分子）如同敏銳的偵探，穿梭于樣品之中，一旦遇見其對應的抗原，便迅速結(jié)合，形成抗原-抗體復合物，這一過程猶如鎖與鑰匙的完美契合，展現(xiàn)了生物分子間的高度專一性。
緊接著，引入一種酶標二抗，它如同攜帶了信號放大器的偵探助手，能夠特異性地識別并結(jié)合到已結(jié)合抗原的抗體上，形成更為復雜的夾心結(jié)構(gòu)。這一步驟不僅進一步加固了抗原-抗體間的聯(lián)系，更為后續(xù)的酶促顯色反應埋下了伏筆。
最終，在底物溶液的催化下，酶標二抗上的酶發(fā)揮其催化作用，將無色的底物轉(zhuǎn)化為有色產(chǎn)物，顏色深淺與待測抗體濃度成正比，宛如一幅生動的畫卷，直觀地展示了抗體存在的痕跡與量級。這一過程，猶如化學魔法般，將微量的生物信息轉(zhuǎn)化為可量化的視覺信號，極大地提高了檢測的敏感性和準確性。
綜上所述，ELISA間接法測抗體以其獨特的優(yōu)勢，在疾病診斷、疫苗效果評估、免疫學研究等領(lǐng)域發(fā)揮著不可替代的作用，是生物醫(yī)學研究中不可或缺的強大工具。
原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司
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