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技術服務

細胞核提取試劑盒

閱讀：199     發布時間：2024/5/30 11:33:28

    細胞核提取試劑盒用于從動物細胞或組織中分離出完整而純化的細胞核。適合于動物軟組織(肝或腦組織)和硬組織(肌肉)以及培養細胞的細胞核的制備。其制備物產量高，可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學等的研究。產品不含污染性蛋白酶和核酶，性能穩定。
   
操作步驟：
1. 樣本處理
a. 組織勻漿：稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內。加入1.0 mL預冷的Lysis Buffer，再加入50μL Reagent A，0℃冰浴中上下研磨組織20次;有未研磨開的組織，可用雙層紗布過濾。
b. 培養細胞勻漿：消化細胞，PBS洗滌，800 g 離心5~10 min收集細胞，計數。每次提取需要5 ×107個細胞，加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸細胞，再加入50μL Reagent A，將細胞懸液轉移到小容量玻璃勻漿器內，0℃冰浴研磨細胞20~30次。
2. 將組織或細胞勻漿物轉移到1.5mL離心管中，4℃，700g 離心5 min。細胞核沉淀在收集管底部，棄上清。加入0.5 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸沉淀。
3. 取另一新離心管內加入0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重懸液，沿管壁小心地加入到此離心管中，置于Medium Buffer之上，4℃，700 g 離心5min。細胞核沉淀在管底。
4. 棄上清，在細胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重懸細胞核沉淀，1000g 離心10min ，棄上清，得到較純的細胞核沉淀。
5. 用50-100μL Store Buffer 或合適的反應緩沖液重懸細胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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