世俱杯2025赛程_中国足彩网首页官网_埃弗顿vs托特纳姆热刺_中国女排现状 - 奥运女足历届冠军一览表

  • 13585831301
  • 021-59541103 021-60443211
  • 3004967995

聯系我們

聯系人: 021-59541103 021-60443211

電話:021-59541103 021-60443211

手機:13585831301

E-mail：3004967995@qq.com

詳細地址： 上海嘉定區嘉羅公路1661

技術服務

Ar 1193 電擊感受態細胞操作方法

閱讀：411     發布時間：2024/5/28 11:59:33

       Ar 1193電擊感受態細胞操作方法，是分子生物學實驗中的一項關鍵技術，對于基因工程、蛋白質表達等領域的研究具有重要意義。該方法通過電擊的方式，將外源DNA導入感受態細胞中，從而實現基因的轉化和表達。
 
    在操作前，需確保所有器具、試劑和電場設備均已消毒并處于最佳狀態。感受態細胞的制備是關鍵步驟，需選用合適的培養基和條件，使細胞處于易于接受外源DNA的狀態。制備過程中，應嚴格控制溫度、pH值和離子濃度等參數，以保證細胞的最佳感受態。
1.0.2cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發，待乙醇揮發干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。  
2.取-80℃保存的農桿菌感受態插入冰中5分鐘，待其融化，加入1-5ug質粒DNA（質粒體積不大于6ul，最好用試劑盒抽提，雙蒸水溶解），用手撥打管底混勻，立即插入冰中，用200ul槍頭將感受態-質粒混合物快速移到電擊杯中，蓋上杯蓋，空管保留待用。  
3.啟動電轉儀，設置參數：C=25uF，PC=200ohm，V=2400V（此參數為Biorad推薦，使用者也可按所用電轉儀推薦的protocol操作），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成快速插入冰中，加入700ul無抗生素的LB并轉移到感受態空管中，28℃振蕩培養2~3小時。  
4.6000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養箱培養2-3天（當平板只含有50ug/mlkan時，28℃培養48h即可；平板中同時加入50ug/mlkan，20ug/mlrif時，需28℃培養60h；如果使用的平板含有50ug/mlrif則需要28℃培養72-90h）。 
電擊轉化時，需將外源DNA與感受態細胞混合均勻，然后置于電場設備中進行電擊處理。電擊條件的選擇對于轉化效率至關重要，需根據細胞類型和DNA濃度等因素進行優化。電擊后，細胞需立即轉移至恢復培養基中，以促進細胞的復蘇和基因的表達。
在操作過程中，還需注意一些細節問題。例如，電場設備的清潔和維護、DNA的純度和濃度、以及操作過程中的無菌條件等，都會影響轉化效率和實驗結果。因此，實驗人員需具備扎實的專業知識和技能，以確保實驗的準確性和可靠性。
 
總之，Ar 1193電擊感受態細胞操作方法是一種高效、可靠的基因轉化技術。通過精心準備和操作，實驗人員可以獲得高質量的轉化細胞，為后續的基因工程研究和應用提供有力支持。
​
 
​

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

品牌中心更多>