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超純RNA提取試劑盒（DNase I）實驗步驟詳述如下

閱讀：2742 發布時間：2024/4/28 14:09:31

超純RNA提取試劑盒(DNase I)實驗步驟詳述如下：

首先，在開啟實驗之前，我們需要將RNA提取液置于65℃的水浴鍋中進行預熱。同時，在每個離心管中加入適量的ME（巰基乙醇），具體加入量依據離心管容量而定，如10mL離心管中加入80ul，50mL離心管中加入300ul。

接著，我們取約0.8g的菌絲體。這些菌絲體可以是液體培養獲得的，此時我們需要用真空抽濾的方式進行處理；若是固體培養獲得的，處理過程則更為簡便。然后，在液氮中迅速將菌絲體磨成精細粉末，并裝入50mL離心管中。按照每1g材料加入8mL預熱后的RNA提取液的比例，將提取液加入離心管中，并顛倒混勻，使菌絲體與提取液充分接觸。

然后，將離心管放入65℃的水浴鍋中，保持3-10分鐘，期間需混勻2-3次，以確保菌絲體中的RNA能夠充分溶解在提取液中。

之后，我們加入等體積的酚（注意是酸酚pH4.5）::異戊醇(25:24:1)進行抽提，離心速度為10,000rpm，溫度為4℃，離心時間為5分鐘。這一步的目的是去除提取液中的蛋白質和其他雜質。

接著，我們取上清液，再次用等體積的:異戊醇(24:1)進行抽提，離心條件同上。

然后，加入1/4V體積的10M LiCl溶液，將離心管置于4℃冰箱中，放置6小時以上（或過夜），使RNA進一步純化。

隨后，我們進行離心操作，離心速度為10,000rpm，溫度為4℃，離心時間為20分鐘。離心后，棄去上清液，用500ul SSTE溶解沉淀。

再次進行酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次，:異戊醇(24:1)抽提1次，離心條件同上。這一步是為了進一步去除雜質，提高RNA的純度。

接著，我們加入2V體積的無水乙醇，在-70℃冰箱中沉淀30分鐘以上，使RNA沉淀析出。

然后進行離心操作，離心速度為12,000rpm，溫度為4℃，離心時間為20分鐘。離心后，棄去上清液，用70%酒精漂洗一次沉淀，然后干燥。

最后，加入200ul的DEPC處理水溶解RNA沉淀。至此，RNA的提取過程就完成了。

為了檢測提取的RNA的質量，我們可以使用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計進行掃描檢測。如果在抽提過程中發現蛋白質含量或其它雜質較多，可以適當增加抽提次數以提高RNA的純度。