免疫細胞化學（ICC）和免疫熒光（IF）實驗方案是生物學研究中常用的兩種重要技術，它們在細胞生物學、分子生物學和病理學等領域具有廣泛的應用。
免疫細胞化學（ICC）是一種通過特異性抗體與細胞內的抗原結合，來揭示細胞內部結構和功能的實驗方法。這種方法主要利用抗體的高度特異性和敏感性，結合化學標記物，通過顯色反應來定位抗原在細胞內的位置。ICC實驗方案通常包括細胞固定、抗原修復、抗體孵育、顯色反應和觀察等步驟。通過精心設計和優化實驗條件，研究人員可以準確地了解抗原在細胞內的分布和表達情況，從而揭示細胞的生命活動規律和疾病發生機制。
免疫細胞化學（ICC）是實驗方案則是一種利用熒光標記物來檢測細胞內抗原分布的方法。與ICC相比，IF具有更高的靈敏度和分辨率，能夠在單個細胞水平上進行精確的抗原定位。IF實驗方案通常包括細胞固定、抗原修復、抗體孵育、熒光標記和觀察等步驟。通過熒光顯微鏡的觀察，研究人員可以直觀地看到抗原在細胞內的熒光信號，從而確定抗原的位置和分布。
一般流程
1. 用聚乙烯亞胺或多聚賴氨酸涂覆蓋玻片，在室溫下放置 1 小時。
2. 用無菌水充分漂洗蓋玻片 3 次，每次 1 小時。
3. 充分干燥蓋玻片，在紫外光下滅菌至少 4 小時。
4. 使細胞在玻璃蓋玻片上生長，或制備 Cytospin 或涂片制備物。
5. 用磷酸鹽緩沖液 (PBS) 簡單漂洗。
推薦使用 1 × PBS 0.1% Tween 20 作為洗滌緩沖液。
固定
可使用以下兩種方法中的一種固定細胞：
1. 室溫下，在 100% 甲醇（-20 ℃ 冷凍）中孵育細胞 5 分鐘。
2. 室溫下，在 4% 多聚甲醛（溶于 PBS 中，pH 7.4）中孵育細胞 10 分鐘。
用冰 PBS 洗滌細胞 3 次。
抗原修復（可選步驟）
在抗原修復緩沖液對細胞進行加熱處理后，有些抗體的效果會更好。查看產品信息，了解每種一抗的使用建議。
1. 將抗原修復緩沖液（100 mM Tris，5% [w/v] 尿素，pH 9.5）預熱至 95 ℃。具體方法為：將裝有緩沖液的蓋玻片染色缸置于水浴鍋中，水浴鍋的溫度設為 95 ℃。
2. 用小型寬頭鑷子小心將蓋玻片置于蓋玻片染色缸內的抗原修復緩沖液中，記下長有細胞的蓋玻片面。
3. 在 95 ℃ 下加熱蓋玻片 10 分鐘。
4. 從抗原修復緩沖液中取出蓋玻片，浸入 6 孔組織培養板內的 PBS 溶液中，保持長有細胞的一面朝上。
5. 用 PBS 洗滌細胞 3 次，每次 5 分鐘。
總之，
免疫細胞化學（ICC）是和免疫熒光實驗方案是生物學研究中不可或缺的重要工具。它們的應用不僅有助于深入了解細胞結構和功能，還為疾病診斷和治療提供了有力的支持。隨著技術的不斷發展，這些實驗方案將在生物學研究中發揮更加重要的作用。
原創作者：上海莼試生物技術有限公司
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