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XL1-Blue MRF`Kan 感受態細胞操作方法

閱讀：89     發布時間：2024/4/7 11:20:22

XL1-Blue MRF`Kan 感受態細胞操作方法：  
1.0.2cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發，待乙醇揮發干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。  
2.取-80℃保存的農桿菌感受態插入冰中5分鐘，待其融化，加入1-5ug質粒DNA（質粒體積不大于6ul，最好用試劑盒抽提，雙蒸水溶解），用手撥打管底混勻，立即插入冰中，用200ul槍頭將感受態-質粒混合物快速移到電擊杯中，蓋上杯蓋，空管保留待用。  
3.啟動電轉儀，設置參數：C=25uF，PC=200ohm，V=2400V（XL1-Blue MRF`Kan 感受態細胞此參數為Biorad推薦，使用者也可按所用電轉儀推薦的protocol操作），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成快速插入冰中，加入700ul無抗生素的LB并轉移到感受態空管中，28℃振蕩培養2~3小時。  
4.6000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養箱培養2-3天（當平板只含有50ug/mlkan時，28℃培養48h即可；平板中同時加入50ug/mlkan，20ug/mlrif時，需28℃培養60h；如果使用的平板含有50ug/mlrif則需要28℃培養72-90h）。
 
XL1-Blue MRF`Kan 感受態細胞培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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