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人胚肺細胞VA13細胞傳代方法

閱讀：86     發布時間：2024/4/2 11:54:33

人胚肺細胞VA13細胞傳代方法:
1.盡量吸干凈T25瓶原培養基；
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s，吸走潤洗的PBS；
3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動培養瓶以使胰酶鋪勻瓶底細胞層；
4.將培養瓶放入37度培養箱消化；
5.消化到細胞間隙變大，但未完全脫落時加2-3ml完全培養基終止胰酶消化；
6.混勻細胞，900rpm離心3-5min，棄上清；
7.加新的完全培養基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養瓶里；
8.補足完全培養基，將培養瓶放回培養箱靜置培養；
特征特性：該細胞系衍生自WI-38細胞。WI-38細胞感染低滴度的SV40病毒，經過連續傳代、克隆選擇獲得多株亞系，其中2RA亞系含有SV40 neo (T)和轉移抗原，從而改變其有限細胞系的特性，可在常規條件下連續傳代。該細胞系的實驗操作甚少在生物安全P2級條件下進行。
凍存方法:
1.消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；
2.將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管；
3.將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜，第二天轉入液氮保存。
注意事項：凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方法。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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