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蛋白磷酸酶抑制劑混合液實驗步驟

閱讀：414     發布時間：2022/3/1 15:58:04

蛋白磷酸酶抑制劑混合液實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
內吞作用輔助蛋白EPN1抗體
內吞作用輔助蛋白EPN2抗體
內質網定位蛋白ERGI3抗體
內質網氧化物蛋白Ero1-Lα抗體
內質網蛋白ERp19抗體
內質網蛋白ERp72抗體
結核分枝桿菌分泌性蛋白ESAT6抗體
真核翻譯起始因子1抗體
上皮粘連調控蛋白ESRP2抗體
T細胞和嗜酸性粒細胞表達特應性皮炎蛋白ETEA抗體
電子轉移黃素蛋白脫氫酶抗體
EGF毒素受體7跨膜結構域蛋白1抗體
乙醇胺激酶2抗體
磷酸化Ets轉錄因子家族ets1抗體
磷酸化上皮細胞癌轉化蛋白2抗體
嗜酸性粒細胞過氧化物酶抗體
核酸內切酶G抗體
酪氨酸蛋白激酶受體A10抗體
胞吐囊復合體蛋白2抗體
磷酸化4E結合蛋白1抗體
磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體
泛素交聯酶抗體
EB病毒核抗原抗體-3B抗體
 

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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