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巴氏細頸線蟲PCR檢測試劑盒試劑準備步驟

閱讀：398     發布時間：2021/2/25 14:17:58

巴氏細頸線蟲PCR檢測試劑盒試劑準備步驟：
 
1. DNA模板
 
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
 
3．10×PCR Buffer
 
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
 
5．Taq酶操作步驟 
 
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
 
      10×PCR buffer             5μl
 
      dNTP mixl                 4μl
 
       引物1（10pM）               2μl
 
       引物2（10PM）              2μl
 
       Taq酶（2U/μl）            1μl
 
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
 
      加ddH2O至               50 μl
 
    視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
 
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
 
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
 
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
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原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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