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膽南星染料法PCR鑒定試劑盒操作流程

閱讀:476     發布時間:2021/2/24 16:59:10

膽南星染料法PCR鑒定試劑盒操作流程
1. 根據要保存的各樣本的體積,計算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量應當是組織體積的10倍(如100mg組織約用1ml RNAwait);離心收集2×106細胞RNAwait的用量是1ml。
2. 將RNAwait按需要量分裝入自備保存管中;
3. 快速將較大的組織切成厚度<0.5 cm的任意片狀,立即完全浸入RNAwait中。組織的厚度一定要<0.5 cm。組織過厚則RNAwait不能有效滲入,組織中間部位的RNA不能受到保護。較小的組織(如大鼠的腎臟、脾臟,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存時先將樣本浸入RNAwait后置4℃冰箱過夜(4℃過夜是必需的,這樣可使RNAwait完全滲入到組織中),然后轉移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃時仍為液態,有結晶析出,是正常情況);或者在4℃冰箱過夜后,從RNAwait中取出組織塊,轉移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的標本,反復凍融至室溫20次不影響RNA的質量。
1.CTAB 溶液在低于15℃時會析出沉淀,因此在將其加入冷凍的植物材料中之前必須預熱。  
2.在最適條件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纖維狀,很容易一下子就從溶液中鉤出。不過,某些植物種的DNA 沉淀中可能含有雜質,特別是多糖,使DNA 沉淀呈絮狀或膠狀,這種情況下可能需要稍事離心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。 
3.飽和酚雖然可有效地使蛋白質變性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用苯酚和氯仿的混合液,可減輕這兩種現象,同時可加入適量的異戊醇(苯酚—氯仿—異戊醇=25:24:1),異戊醇的作用是消泡,并使蛋白質層緊密,使水相和有機相分層較好。 細菌的培養和收集 將含有質粒pBS 的DH5α菌種接種在LB 固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24 小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB 液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12 小時至對數生長后期。小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA 十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速,能同時處理大量試樣,所得DNA 有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
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