如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

1.去培養上清,用不含鈣、鎂高子的PBS潤洗細胞1-2次。

2カ2mi化液(0.25% Trypsin-0.53 MM EDTA)于培養飛中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然言在売微境下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下高心4分鐘,棄去上請液,補加1-2mL培并液后吹勻。

4.將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8m培養基的新皿中或者瓶中。細胞復蘇步張:將含有1mL胞液的凍存管在37て水浴中迅速鬼解凍,加入4mL培養基混合均勻。在

條件下離心4分鐘清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8m培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞空度。細胞六存步待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例;1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗麗底1-2次后加入1ml酶,細胞變園脫落后,加入2m完全培養基終止消化,可使用血球計數板計數。2.1000RPM高心5分鐘去揮上清。用血清重暴浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存普細數目大于1X106個細胞六存3.將東存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮情存。記錄六存管位置以便下次拿取。

運輔和保存視天氣狀泥和運距高遠近,公司與客戶協商后遠擇下述方式中的一種進行

1)1mL凍存細液裝于1.ml的凍存管中,置了続滿干水的泡沫保溫盒中進行運;收到胞后青盡快解六復蘇細胞進行培養,如無法立刻進行復蘇提作,凍存細胞可在80℃的條件下保存1個月。

2)T-25培瓶充滿完全培養基后進行第溫運;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態,如鋪瓶本超過85%青立印進行傳代提作,如慧浮的細胞較多,請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼。