產品屬性：

產品名稱	英文名稱	規格	貨號
細胞可滲透鈣離子熒光探針	Indo-1, AM,Cell Permeable	50μg\|5×50μg\|1mg	CS-01F97032

Indo-1是一種細胞生物學常用的鈣離子熒光探針，與Fura-2為目前使用廣泛的比率法測定的鈣熒光指示劑，Indo-1能特異性地結合Ca2+，同時可發出熒光，結合Ca2+后的大發射波長從結合前的475nm向400nm（Ca2+飽和時）偏移，該信號變化可被流式細胞儀較好的捕捉：在氬離子激光器的351-364光譜范圍內單一波長激發該探針，在400nm和475nm的波長處分別檢測結合鈣離子和未結合鈣離子的熒光信號，通過二者熒光度的比率測定鈣離子濃度。

由于Indo-1是極性大的酸性化合物，無法進入細胞內，為此在其負性基團上結合乙酰氧甲酯，使其成為Indo-1/AM，該變化既增加了酯溶性又消除了負電荷，極大的提高了細胞滲透性。在細胞內，Indo-1/AM被酯酶水解成Indo-1后可與胞漿游離Ca2+可逆性結合。

CAS：112926-02-0

分子式：C47H51N3O22

分子量：1009.91

Ex/Em：346nm/475nm

溶解性：溶于DMSO

儲存條件：-20℃，有效期6個月

Indo-1是一種細胞生物學常用的鈣離子熒光探針，與Fura-2為目前使用廣泛的比率法測定的鈣熒光指示劑，Indo-1能特異性地結合Ca2+，同時可發出熒光，結合Ca2+后的大發射波長從結合前的475nm向400nm（Ca2+飽和時）偏移，該信號變化可被流式細胞儀較好的捕捉：在氬離子激光器的351-364光譜范圍內單一波長激發該探針，在400nm和475nm的波長處分別檢測結合鈣離子和未結合鈣離子的熒光信號，通過二者熒光度的比率測定鈣離子濃度。

由于Indo-1是極性大的酸性化合物，無法進入細胞內，為此在其負性基團上結合乙酰氧甲酯，使其成為Indo-1/AM，該變化既增加了酯溶性又消除了負電荷，極大的提高了細胞滲透性。在細胞內，Indo-1/AM被酯酶水解成Indo-1后可與胞漿游離Ca2+可逆性結合。

CAS：112926-02-0

分子式：C47H51N3O22

分子量：1009.91

Ex/Em：346nm/475nm

溶解性：溶于DMSO

儲存條件：-20℃，有效期6個月

糖原染色是病理學中常規的染色方法之一，高碘酸-雪夫技術是McManus在1946年先使用的，常用來顯示糖原和其他多糖，而且還能顯示中性黏液性物質和某些酸性物質。阿利新藍和PAS技術聯合使用可鑒別同一組織切片中的中性粘液和酸性粘液。

阿利新藍（又稱阿爾辛藍、愛先藍），是類銅鈦花青染料，這種陽離子染料與酸性基團結合，即阿利新藍與組織內含有的陰離子基團如羧基和硫酸根形成不溶性復合物，可將唾液黏蛋白、硫黏蛋白和蛋白多糖染成藍色。PAS技術可將中性粘液染成紅色，由于阿利新藍與雪夫試劑結合并發生反應，又將既含中性粘液又含酸性粘液的組織和細胞染成深淺不同的紫色。終，實驗結果中酸性粘液物質呈藍色，中性粘液物質呈紅色，混合粘液物質呈紫紅色，細胞核呈淺藍色。

產品組份：

阿利新藍染液（藍色液體）————20 ml

高碘酸溶液（無色液體）—————20 ml

雪夫試劑（淡紅色液體）—————20 ml

蘇木素（紫紅色液體）——————20 ml

注意事項

1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2）試劑盒臨用前前半小時取出恢復室溫，用后應放回冰箱保存。

3）雪夫試劑染色時間不宜過長，一般組織變色后即可。

4）蘇木素復染細胞核時應淡染，這樣與阿利新藍容易區別，也可以選擇不染。
儲存條件：室溫，有效期36個月

實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量

(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養細胞直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。

c．細胞懸液離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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